利用荧光光度计进行荧光分析的方法称为分子荧光光度法。它的测试原理同紫外分光光度法，只是它检测的是荧光，即它检测的是荧光增白剂的分子经紫外光激发后发射出较激发光波长更长的荧光。荧光增白剂的荧光光谱反映了荧光增白剂的特性，不同的荧光增白剂具有相对固定的激发波长和荧光光谱，因此荧光光度法也是荧光增白剂分析中的一种重要方法。
具体的方法为:①配制系列标准溶液;②在较合适的激发波长下测量不同浓度标准溶液的荧光强度，以此在坐标纸上绘制标准曲线;③配制待测样品的溶液，浓度与标准溶液的浓度要相近;④在与②相同的条件下测定待测样品的荧光强度，并从标准曲线上求得其原始浓度，根据待测样品的质量可推算出该样品的纯度或商品的强度。
采用这种方法需要注意的是，荧光光度计的灵敏度远远高于吸收光谱的分光光度计，因而测试时所需要的样品浓度远远低于测试紫外光谱时的浓度，一般为后者浓度的1/100~1/1000。浓度过高时，荧光物质的发光强度由于浓度猝灭效应反而低于它在浓度较稀时的强度81.
